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Jul 30, 2023

Cilios

Informes científicos volumen 13,

Scientific Reports volumen 13, Número de artículo: 8205 (2023) Citar este artículo

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Los cilios primarios son orgánulos conservados que integran señales extracelulares en señales intracelulares y son fundamentales para diversos procesos, incluido el desarrollo celular y las respuestas de reparación. Los déficits en la función ciliar causan enfermedades humanas multisistémicas conocidas como ciliopatías. En el ojo, la atrofia del epitelio pigmentario de la retina (EPR) es una característica común de muchas ciliopatías. Sin embargo, las funciones de los cilios del RPE in vivo siguen siendo poco conocidas. En este estudio, primero encontramos que las células RPE de ratón solo forman transitoriamente cilios primarios. Luego examinamos el RPE en el modelo de ratón del Síndrome de Bardet-Biedl 4 (BBS4), una ciliopatía asociada con la degeneración de la retina en humanos, y descubrimos que la ciliación en las células RPE mutantes BBS4 se interrumpe temprano durante el desarrollo. A continuación, usando un modelo de lesión inducida por láser in vivo, encontramos que los cilios primarios en el EPR se vuelven a ensamblar en respuesta a la lesión por láser durante la cicatrización de la herida del EPR y luego se desensamblan rápidamente una vez que se completa la reparación. Finalmente, demostramos que el agotamiento específico de RPE de los cilios primarios en un modelo de ratón condicional de pérdida de cilios promovió la cicatrización de heridas y mejoró la proliferación celular. En resumen, nuestros datos sugieren que los cilios del EPR contribuyen tanto al desarrollo como a la reparación de la retina y brindan información sobre posibles objetivos terapéuticos para enfermedades degenerativas del EPR más comunes.

El epitelio pigmentario de la retina (EPR) es una monocapa polarizada de células esencial para el desarrollo de los fotorreceptores y la función visual porque su interacción con los fotorreceptores es fundamental para el mantenimiento de la retina. En consecuencia, la disfunción del EPR está relacionada con muchas enfermedades, incluida la degeneración macular1,2,3,4,5. La degeneración macular relacionada con la edad (DMAE) es una de las principales causas de ceguera irreversible en la población anciana6,7,8. A pesar de los considerables avances en el tratamiento de la DMAE húmeda, no existen estrategias efectivas para el tratamiento de la DMAE seca, que incluye el 90% de todos los casos diagnosticados9,10,11. Se postula que la pérdida del RPE es una de las principales causas de AMD12,13,14,15. Comprender el potencial de la regeneración endógena del EPR podría revelar nuevas estrategias terapéuticas potenciales para enfermedades como la DMAE seca16,17,18,19.

El cilio primario es una estructura solitaria basada en microtúbulos presente en casi todos los tipos de células de mamíferos posmitóticos20,21,22,23,24,25,26. Este pequeño apéndice celular puede detectar cambios en el entorno externo y traducir estas señales en cascadas de señalización intracelular. Debido a que son esenciales para la embriogénesis normal, la interrupción de los cilios primarios provoca malformaciones en el desarrollo de casi todos los sistemas de órganos20,27,28,29,30,31,32. Los cilios primarios también desempeñan funciones importantes en los procesos posteriores al desarrollo, como la proliferación celular y la reparación de heridas20,33,34,35,36,37,38,39. Las mutaciones en los genes necesarios para la formación y el funcionamiento de los cilios causan un espectro de enfermedades humanas, denominadas colectivamente ciliopatías, que se presentan como trastornos clínicos como poliquistosis renal, obesidad, degeneración retiniana y atrofia del EPR40,41,42,43,44,45. IFT88 es parte del complejo de transporte intraflagelar que se requiere para la ciliogénesis46. El síndrome de ciliopatía prototípica de Bardet-Biedl (BBS) resulta de mutaciones en los genes BBS. Productos para varios genes BBS para BBSome, un importante complejo proteico multimérico crítico para regular la composición de señalización del compartimento ciliar47,48,49,50,51,52. El miembro de BBSome, BBS4, desempeña múltiples funciones en la proliferación celular y el mantenimiento de los cilios53,54.

Cada vez hay más pruebas que respaldan el papel de los cilios en la coordinación de la proliferación y la migración celular, que cuando son disfuncionales pueden provocar defectos en la cicatrización de heridas33,34,37,55,56,57,58,59. Debido a que el cilio apunta en la dirección migratoria, se piensa que los cilios primarios pueden participar en los procesos cíclicos en la migración celular direccional durante la reparación del tejido37,58. Por ejemplo, en las células de la piel, los cilios primarios juegan un papel importante en el control de la proliferación en la cicatrización de heridas60. Es ampliamente conocido que los cilios defectuosos aumentan la proliferación celular durante la patogénesis de diversos trastornos33,56,61. En otro ejemplo, la eliminación de un gen de transporte intraflagelar diferente, IFT20, en células del conducto colector de riñón de ratón da como resultado la proliferación y el desarrollo de quistes que conducen a la enfermedad renal quística62.

Las líneas de células RPE inmortalizadas se han utilizado ampliamente como un sistema modelo para estudiar los complejos de proteínas de los cilios y la ciliogénesis 22,38. Sin embargo, las funciones de los cilios del RPE in vivo seguían siendo en gran parte desconocidas. Recientemente, se descubrió que los cilios son necesarios para la maduración del EPR63,64. Debido a que los cilios del EPR de roedores se reabsorben después de la maduración64,65, no está claro si la renovación de los cilios contribuye a las actividades de reparación y regeneración del EPR en la edad adulta.

Aquí, investigamos el papel de los cilios primarios en las respuestas proliferativas y reparadoras del RPE de ratones a la ablación láser dirigida. Mostramos que BBS4 juega un papel importante en la ciliogénesis RPE in vivo. Utilizando ratones transgénicos y tecnología de inmunofluorescencia, también proporcionamos evidencia de que los cilios primarios del RPE de ratón adulto se vuelven a ensamblar en respuesta a la lesión inducida por láser durante la cicatrización de heridas. Además, caracterizamos la función de los cilios primarios mediante la utilización de un alelo condicional de Ift88 para extirpar los cilios y su formación potencial en el RPE posnatal. Demostramos que la eliminación de cilios promueve la reparación de tejidos al mejorar la proliferación celular.

Estudios previos informaron que los cilios primarios del RPE de roedores se desensamblan después de la maduración retiniana64,65. Sin embargo, el momento del desmontaje de los cilios es muy diferente en las ratas en comparación con los ratones C57BL/6 pigmentados64,65. Mientras que más del 60 % de las células del RPE contienen cilios en ratas el día después del nacimiento, el día postnatal 1 (P1), solo se encuentran unos pocos RPE ciliados en los ratones C57BL6. Estábamos interesados ​​en saber si esto se debía a una diferencia de especies entre ratones y ratas. Para investigar más a fondo la medida en que los cilios se reabsorben en RPE de ratón en otra cepa, analizamos el RPE de ratones albinos CD1 en preparaciones de retina de montaje plano de P0 a P21 (Fig. 1A). Los cilios primarios se identificaron mediante inmunofluorescencia para Arl13b, un marcador de membrana de cilios de uso común57,66. Las uniones estrechas se visualizaron mediante inmunofluorescencia para ZO-167. Las células RPE con cilios primarios fueron abundantes en el día 0 postnatal (P0), pero su frecuencia disminuyó significativamente en animales de 3 semanas (P21), cuando se consideró que la retina estaba en gran parte madura. Curiosamente, el porcentaje de células ciliadas en el área central (cerca del nervio óptico) fue mayor en P7 (aproximadamente 80 %), mientras que solo se detectaron unos pocos RPE ciliados en P7 en ratones pigmentados64. Por P14, la reducción de células ciliadas fue significativamente mayor en el EPR central que en el EPR periférico. Los cilios primarios eran indetectables tanto en el RPE periférico como en el central en P21, lo que sugiere que la mayoría de las células del RPE habían perdido sus cilios o que la longitud de sus cilios se había reducido o que ya no eran positivos para Arl14b (Fig. 1B). Los cambios en la longitud ciliar teñida con Arl13b acompañaron a la reabsorción de los cilios: la longitud media disminuyó de 1,4 μm en P0 a 0,2 μm en P14 en el área central, y de 1,1 μm en P0 a 0,6 μm en P14 en el área periférica (Fig. 1C). El análisis de las áreas celulares del RPE en diferentes etapas de desarrollo mostró una tendencia hacia un aumento progresivo en el tamaño celular tanto en las áreas central como periférica (Fig. 1D). Curiosamente, observamos un grupo de RPE biciliados durante las etapas de desarrollo (Fig. S1). En P0, el 1,62 ± 1,44 % del RPE ciliado estaba biciliado en el área periférica, mientras que el 10,26 ± 5,43 % en el área central. En P7, el 12,11 ± 3,50 % del RPE ciliado estaba biciliado en el área periférica, mientras que el 13,58 ± 6,99 % en el área central. Los RPE que estaban bi-ciliados eran mononucleados o binucleados. Tomados en conjunto, estos resultados mostraron que el momento de la reabsorción de los cilios primarios en los ratones CD1 es diferente de C57CL6. Además, el desmontaje de los cilios varía en las áreas central y periférica en ratones CD1. Comenzando en P0 en el área periférica y en P7 en el área central, los cilios se desensamblan progresivamente en el RPE de estos ratones y parecen estar casi ausentes en P21.

Desmontaje de cilios primarios durante el desarrollo en RPE de ratón albino. El ensamblaje y desensamblaje de los cilios primarios se regulan dinámicamente durante el desarrollo del RPE en ratones albinos CD1. (A) Imágenes confocales de muestras de retina de montaje plano en diferentes edades posnatales que muestran las áreas periféricas o centrales del RPE. ZO-1 tinción de uniones celulares (rojo), Arl13b es un marcador ciliar (verde), núcleos (azul). Se muestran ampliaciones de cada imagen correspondiente. Barras de escala: pequeñas 20 μm; imágenes ampliadas 20 μm. Las flechas indican los cilios. (B) Cuantificación de la ciliación en RPE durante el desarrollo. P0 n = 50 celdas, P7 n = 50 celdas, P14 n = 50 celdas, P21 n = 50 celdas. Número de ojos: 3 o 4 por punto de tiempo. (C) Cuantificación de la longitud del cilio (D) Cuantificación del área celular. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando la prueba t de Student, p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Los ratones knockout para BBS4 recapitulan muchos de los fenotipos de ciliopatía humana, incluida la degeneración retiniana68. Para investigar si BBS4 juega un papel en la ciliogénesis y maduración del RPE y podría contribuir a su degeneración retiniana, analizamos el RPE en montajes planos de ratones nulos Bbs4 de línea germinal en P0 y en controles emparejados por edad usando el mismo enfoque que tomamos para nuestro albino CD1 análisis (Fig. 2A). Nuestros resultados mostraron que los niveles de ciliación se redujeron significativamente en RPE sin Bbs4 en comparación con las células de control. Para el área central, la ciliación de montajes planos de RPE en ratones sin Bbs4 fue del 53,8 % en comparación con el 74,9 % en el grupo de control de la misma edad. Para el área periférica, la ciliación de montajes planos de RPE en ratones sin Bbs4 fue del 51,2 % en comparación con el 78,1 % en el control de tipo salvaje (Fig. 2B). De acuerdo con los resultados de la ciliación, la longitud ciliar también fue moderadamente más corta en el RPE nulo Bbs4 en comparación con los controles en las áreas central y periférica (Fig. 2C), aunque las diferencias no fueron estadísticamente significativas. La longitud ciliar media en RPE flatmounts fue de 1,3 μm en el área central de los ratones sin Bb4 y de 1,6 μm en el control de tipo salvaje; 1,2 μm en el área periférica en Bbs-null RPE y 1,6 μm en el control de tipo salvaje. Además, hubo una tendencia hacia un mayor tamaño celular en el área central del grupo mutante, mientras que el tamaño celular en el área periférica permaneció sin cambios (Fig. 2D). Además, el nivel de expresión general de ZO-1 no reveló diferencias significativas entre el control y los ratones sin Bbs4.

La pérdida de BBS4 afecta la ciliación en RPE in vivo. La eliminación de BBS4 altera la ciliación de RPE in vivo. (A) Imágenes de inmunofluorescencia representativas de montajes planos de RPE de ratón P0 de áreas periféricas y centrales de compañeros de camada WT y BBS4-null, etiquetados con anticuerpos para cilios primarios y uniones celulares (Arl13b en verde y ZO-1 en rojo) Barras de escala: 20 pequeñas micras; imágenes ampliadas 20 μm. Las flechas indican los cilios. (B) Cuantificación de la ciliación en RPE durante el desarrollo. En promedio, se contaron aproximadamente 200-300 células en el centro o en la periferia del RPE para cada grupo de edad. n = 3 ojos. (C) Cuantificación de la longitud ciliar en RPE durante el desarrollo. (D) Cuantificación del tamaño celular en RPE durante el desarrollo. Barras de escala: 20 μm. n = 1. Los análisis estadísticos en (B)–(D) se realizaron mediante la prueba t de Student, donde P < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Investigamos más a fondo el perfil ciliar en tejido RPE humano adulto. Antes de realizar la inmunohistoquímica, utilizamos el método de limpieza iDiSCO, que vuelve transparente el tejido intacto69. Los resultados revelaron que el RPE humano adulto formó cilios primarios, como lo confirmó el marcaje con ARL13B, y que los cilios estaban presentes en casi todas las células a lo largo de la monocapa (Fig. 3). La longitud media de los cilios primarios fue de 3,2 μm. Además, encontramos una disminución significativa tanto en la ciliación como en la longitud ciliar en RPE de pacientes con AMD (n = 1) en comparación con RPE sanos. Juntos, estos resultados mostraron que el RPE humano, a diferencia de la contraparte murina libre de mácula, forma cilios primarios en adultos, lo que sugiere que los cilios juegan un papel en el RPE humano que persiste después de que se completa el desarrollo y que pueden ser defectuosos en condiciones de enfermedad humana, como como degeneración macular.

Cilos primarios defectuosos en RPE de un paciente con AMD. (A) Imágenes confocales teñidas para Arl13b (verde) y ZO-1 (rojo) de pacientes humanos sanos con RPE y AMD. (B) Cuantificación de la ciliación en RPE (4–5 imágenes confocales de 63 × individuales se tomaron imágenes/contaron del área periférica de cada muestra de RPE humana. 223 × 223 µm2/imagen). (C) Cuantificación de la longitud ciliar en RPE. Barras de escala: 10 μm. n = 1. Los análisis estadísticos en (B)–(D) se realizaron mediante la prueba t de Student, donde p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Para comprender si la pérdida ciliar puede afectar el RPE posnatal in vivo, generamos ratones transgénicos con pérdida posnatal selectiva de RPE de cilios primarios (ratones RPE-cKO). Combinamos un alelo condicional (floxed) de la proteína de transporte intraflagelar (Ift88), que es esencial para la formación y el mantenimiento de los cilios, con un alelo Cre impulsado por el promotor BEST1 para impulsar la pérdida de cilios específica de RPE. El transgén BEST1-Cre impulsa la expresión de Cre ocular que comienza después del nacimiento alrededor de P1070,71. La expresión en mosaico de BEST1-Cre en el RPE nos permitió evaluar simultáneamente el impacto de la pérdida de cilios en el RPE y en el control de las células vecinas en la retina. Realizamos el genotipado y examinamos la expresión de Cre mediante inmunotinción en montajes planos de RPE de cada ratón, luego nos enfocamos en ratones con una expresión del 90% para un análisis adicional (Fig. 4A, B). Observamos defectos de pigmento en parches (hipopigmentación regional) en ratones RPE-cKO en montajes planos de RPE y con lámpara de hendidura (Fig. 4C, D, Fig. S3). Para investigar la maduración de RPE en ratones RPE-cKO, comparamos la intensidad de fluorescencia de RPE65 en montajes planos de RPE en ratones RPE-cKO y control. Analizamos tanto la zona central como la zona periférica (fig. 4E-G). Encontramos una disminución significativa en la expresión de RPE65 en ratones RPE-cKO en comparación con el grupo de control. A continuación, comparamos la expresión de ezrin, un marcador de polaridad para RPE, y ZO-1 en RPE-cKO y ratones de control, pero no encontramos diferencias (Fig. S2). Para evaluar la morfología y la función de los fotorreceptores en ratones RPE-cKO, evaluamos el grosor de la capa de fotorreceptores mediante imágenes OCT y la respuesta eléctrica de los fotorreceptores mediante ERG en ratones de 2 y 6 meses (Fig. 4H-M, Fig. S2) . Ni las respuestas ERG escotópicas (adaptación a la oscuridad) ni fotópicas (adaptación a la luz) mostraron diferencias significativas en las amplitudes de las ondas b o a entre los ratones RPE-cKO y los controles a los 2 o 6 meses de edad. Estos datos sugirieron que los RPE están levemente comprometidos, pero no lo suficientemente graves como para dañar la actividad de los fotorreceptores.

Hipopigmentación y pérdida de RPE65 tras la pérdida condicional de cilios en ratones. Evaluación del impacto de la pérdida condicional de cilios en el RPE, la retina y la función visual. (A, B) Montajes planos de RPE teñidos con anticuerpo Cre (rojo) que revelan la expresión de Cre en el grupo RPE-cKO. (C, D) Montaje plano de RPE de ratones RPE-cKO que muestran hipopigmentación regional en el RPE periférico indicado con un cuadro rojo. Barras de escala: 300 μm. (E, F) Tinción de RPE65 (verde) en montajes planos de RPE en los grupos knockout y control a los 2 meses de edad. El gráfico muestra los niveles de fluorescencia cuantitativa para la tinción de RPE65 a lo largo del tiempo. (H–J) Imágenes SD-OCT de controles y retinas de ratón RPE-cKO de 2 a 6 meses de edad. Medición del espesor de la capa nuclear externa (ONL) obtenida de ambos puntos de tiempo. (K-M) Grabaciones de electrorretinograma (ERG) para RPE-cKO y ratones de control. ERG adaptado a la oscuridad que muestra la función del fotorreceptor de bastón. ONL; capa nuclear externa, RGL; capa de células ganglionares de la retina, INL; capa nuclear interna. n = 3 animales en el grupo RPE-cKO de 2 meses; n = 5 animales en el grupo de control de 2 meses; n = 5 animales en el grupo RPE-cKO de 6 meses; n = 3 animales en control de 6 meses. Los análisis estadísticos se realizaron mediante ANOVA unidireccional, p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo. Barras de escala: 20 μm.

En el endotelio de la córnea del ratón, los cilios primarios se desensamblan en la edad adulta pero se vuelven a ensamblar en respuesta a la reparación del tejido inducida por la lesión72. Estos hallazgos nos llevan a plantear la hipótesis de que los cilios del EPR también pueden reformarse en respuesta a lesiones y daños. Elegimos probar esta idea, utilizando un enfoque de lesiones inducidas por fotocoagulación con láser que se ha utilizado comúnmente para investigar la cicatrización de heridas RPE in vivo73,74,75. Realizamos fotocoagulación con láser en ratones transgénicos dobles con cilios y cuerpos basales (Arl13b-mCherry; Centrin2-GFP), lo que nos permitiría visualizar directamente cilios, centriolos y cuerpos basales in vivo mediante microscopía de fluorescencia76,77,78,79. La capa de RPE/coroides se recolectó en diferentes puntos de tiempo después de la lesión por láser. Los bordes de RPE se etiquetaron con ZO-1 y se representaron como montajes planos. Descubrimos que el RPE del ratón respondió a la lesión al volver a formar sus cilios en células migratorias y recién proliferadas durante la cicatrización de heridas del RPE y que los cilios primarios se reabsorbieron cuando la reparación parecía completa (Fig. 5A). Específicamente, 1 hora después de la lesión por láser, los bordes de las células del RPE se redujeron dentro de un borde claro del patrón de puntos del láser, lo que indica la pérdida de células del RPE en esta región. Los RPE adyacentes al área tratada con láser permanecieron en forma hexagonal y no ciliados. A las 48 h después de la lesión, los cilios primarios (el reportero Arl13b-mcherry apareció junto al cuerpo basal de centrina-GFP) se volvieron detectables por primera vez en células adyacentes agrandadas y que proliferaban recientemente (células de tamaño pequeño). A las 72 h después de la lesión, la mayor parte del área tratada con láser estaba cubierta por células y células ciliadas adicionales. Curiosamente, también se detectaron algunos RPE ciliados esporádicos en áreas sin láser a 500 μm del sitio del láser, lo que sugiere que las células RPE adicionales también estaban respondiendo a pesar de que su morfología permaneció sin cambios. Los cilios primarios eran apenas detectables el día 7 después del daño por láser desde que se completó la reparación. Se midieron las medidas de ciliación y longitud ciliar durante el proceso de reparación y mostraron que la ciliación era mayor a las 72 h después del láser (Fig. 5B, C). Investigamos más a fondo si la ubicación del cuerpo basal se relacionaba con la dirección migratoria midiendo la distancia entre el cuerpo basal y la mediana celular como se describe72. Nuestros resultados no mostraron diferencias significativas durante la cicatrización de heridas, lo que indica que los cilios del EPR no están involucrados en el patrón celular en reparación (Fig. 5D). En resumen, nuestros datos mostraron que los cilios primarios se reforman en las células adultas del RPE durante la cicatrización de heridas, lo que indica que los cilios recién formados pueden contribuir a la cicatrización de heridas en el RPE de ratón in vivo.

Reensamblaje de cilios primarios en RPE adulto durante la reparación. (A) Imágenes de inmunofluorescencia representativas que muestran el área de la herida de montajes planos de RPE 0, 2, 3, 7 días después de la lesión por láser. Área láser (círculos de puntos amarillos) con cilios marcados (Arl13b en rojo y Centrin2 en verde) y borde RPE (blanco) que se muestra en soportes planos RPE. A 1 h después del láser, el RPE cerca del área del láser permanece aciliado. Los cilios primarios (círculo rojo) se detectan en el RPE migratorio y recién proliferado cerca del área del láser a las 72 hy apenas se detectan el día 8 después del láser. El borde de la celda se muestra en blanco teñido con ZO-1, Arl13b en rojo y Centrin2 en verde. (B, C) Cuantificación de ciliación y longitud ciliar (n = 4). (D) Medición entre la ubicación del cuerpo basal y el medio celular. n = 3 animales por grupo. Barras de escala: 20 μm. Los análisis estadísticos se realizaron mediante ANOVA unidireccional, p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Estudios previos han demostrado que la fotocoagulación con láser da como resultado la proliferación de células RPE en ojos de ratones durante el proceso de cicatrización de heridas73,80,81. Para investigar la participación de los cilios primarios en esta reparación y proliferación de heridas RPE, utilizamos fotocoagulación con láser para producir una lesión de tamaño constante para inducir la cicatrización de heridas en nuestros ratones RPE-cKO condicionales y controles de la misma edad. Recolectamos RPE/capa coroidea 24 h y 48 h después de la administración del láser y visualizamos la morfología de RPE mediante tinción con faloidina en montajes planos. A las 24 horas posteriores al tratamiento con láser, no se detectaron diferencias significativas en el tamaño de la herida en ambos grupos. Sorprendentemente, el tamaño del área de la herida se redujo significativamente en el grupo RPE-cKO en comparación con los controles, y en el grupo de control, el revestimiento del área de la herida permaneció incompleto a las 48 h (Fig. 6A, B). En el grupo RPE-cKO, la curación estaba casi completa en este momento. En comparación con los grupos de control de la misma edad, encontramos una reducción significativa en la tasa de reensamblaje de los cilios primarios, según la señal de Arl13b, en ratones RPE-cKO después de 48 h de tratamiento con láser (Fig. S4, 48,70 ± 4,71 % en ratones de la misma edad). grupos de control al 8,06 ± 4,95% en ratones RPE-cKO). Para investigar si los cilios defectuosos promovieron la cicatrización de heridas del RPE al regular la actividad proliferativa, evaluamos el número total de células, determinado por tinción con faloidina y tinción de núcleos en la capa de RPE tratada con láser (diámetro en 200 μm). El análisis mostró un número de células significativamente mayor en el área tratada con láser del grupo mutante RPE-cKO en comparación con los controles en ambos puntos de tiempo (Fig. 6C). Se encontraron células positivas para Ki67 en la capa RPE del área tratada con láser y en el área adyacente no tratada. Luego evaluamos la cantidad de células positivas para Ki67 dentro de un diámetro de 500 μm, que incluye la mayoría de las células en proliferación, y encontramos una diferencia significativa entre RPE-cKO y los grupos de control a las 24 h después del láser, lo que indica que los cilios defectuosos mejoraron la proliferación celular durante la cicatrización. . Las células positivas para Ki67 estaban presentes en ambos grupos a las 48 h después del láser. Tomados en conjunto, estos resultados demostraron que los cilios defectuosos promueven la cicatrización de heridas en RPE de ratón.

Los cilios defectuosos promueven la cicatrización de heridas mediante el control de la proliferación. (A) Análisis de inmunofluorescencia de faloidina (rojo) y anticuerpo Ki67 (amarillo) en montajes planos de RPE de RPE-cKO y ratones de control a las 24 h y 48 h después del tratamiento con láser. Se prepararon montajes planos de RPE a partir de ratones RPE-cKO adultos y ratones de control 24 h y 48 h después de la fotocoagulación con láser (24 h: n = 6 y 10 ojos; 48 h: n = 4 y 8 ojos) y se tiñeron con Ki67 (marcador de células proliferativas ) y faloidina (borde celular). (B) Cuantificación del tamaño de la herida en RPE-cKO y grupos de control en función de la tinción con faloidina, que fue analizada por ImageJ con corrección manual (cegada a los grupos de muestra durante el análisis). (C) Cuantificación del número de células dentro del área del láser (200 μm). (D) Cuantificación del número de células positivas para Ki67 dentro de 500 μm. Barras de escala: 20 μm. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando la prueba t de Student, p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Aquí describimos un papel novedoso de los cilios primarios en la reparación de heridas del RPE de ratón adulto. Primero confirmamos la retracción de los cilios primarios en diferentes líneas de ratones de informes anteriores y demostramos que BBS4 contribuye a la ciliación. Estos datos amplían los hallazgos previos para los cilios del RPE durante el desarrollo63,64. También encontramos que los cilios primarios persisten en el RPE durante la edad adulta en humanos, lo que sugiere que continúan contribuyendo a las funciones celulares después de la maduración. Además, demostramos que los cilios primarios se vuelven a ensamblar después de la lesión, que persisten durante el proceso de reparación y que el agotamiento condicional de Ift88 del RPE influye en la proliferación, lo que promueve la cicatrización de heridas.

Solo unos pocos estudios se han centrado en comprender la morfología y la función de los cilios primarios en el RPE in vivo, que se ignoraron durante décadas. Se sabe que los cilios primarios son esenciales para la maduración del EPR en ratones y actúan regulando la señalización canónica de Wnt63. También se sabe que los cilios primarios del RPE se reabsorben después de la maduración, lo que depende de las proteínas BBSome y de la señalización canónica-Wnt64, aunque informes contradictorios han sugerido que los cilios en los RPE de ratón se retienen durante la edad adulta82. El presente estudio encontró que los niveles de cilios primarios en ratones albinos también disminuyen con el aumento de las etapas de desarrollo, lo que respalda los informes de Patnaik et al.64. Además, encontramos que el tiempo de retracción de los cilios se retrasó en ratones albinos en comparación con ratones pigmentados C57BL/6. Esto nos sugirió que tal vez en una retina albina propensa a posibles procesos de lesiones inducidas por la luz, los cilios pueden permanecer y estar involucrados en un proceso de reparación potencial que no se observa fácilmente en una retina de ratón pigmentada. Un estudio previo de cilios en ratas albinas también descubrió cilios primarios en la etapa posnatal65. Se ha demostrado que la ciliogénesis controla negativamente la melanogénesis en los melanocitos83. Alternativamente, las diferencias en el tiempo de retracción pueden deberse a diferencias de tensión o estar directamente relacionadas con la síntesis de melanina. Se ha demostrado que BBS6 y BBS8 participan en el desmontaje de los cilios y la maduración del RPE en el RPE de ratón durante el desarrollo64. Específicamente, el RPE con deficiencia de BBS8 mostró defectos fenotípicos y afectó la homeostasis del RPE84. Aquí, mostramos un papel significativo de BBS4 en la ciliogénesis del RPE durante el desarrollo. Curiosamente, los informes anteriores indican que la ausencia de BBS8 o BBS6 perjudicó tanto la ciliación como la longitud ciliar en el RPE del ratón. No encontramos ningún cambio en la longitud ciliar en el RPE knockout para BBS4. Además, encontramos que los RPE humanos retienen niveles estables de ciliación en la edad adulta. Por lo tanto, es probable que las diferencias en los perfiles de ciliación sean causadas por diferencias específicas de especie en la regulación de los cilios primarios. Curiosamente, encontramos que las células RPE humanas retienen niveles estables de ciliación en edades adultas. Las diferencias en los perfiles de ciliación probablemente se deban a diferencias específicas de especie en la regulación de los cilios primarios. Los cilios primarios en el RPE del ratón pueden ser cruciales en este tejido y otras células oculares en el desarrollo de la retina, pero prescindibles para la función celular en el RPE adulto porque los ratones no poseen una mácula. Por el contrario, los cilios primarios parecen ser esenciales en el RPE de humanos adultos y están alterados en la enfermedad de la retina. Por lo tanto, es poco probable que los ratones proporcionen modelos óptimos para la investigación de las ciliopatías oculares.

Durante el proceso de reparación de la herida, las células epiteliales que rodean la lesión proliferan y migran para resurgir en la superficie de la herida60,85. Se postula que los cilios primarios experimentan alteraciones importantes durante la cicatrización de heridas58,60,86, y se considera que el proceso de ensamblaje/desensamblaje de los cilios está profundamente involucrado en la respuesta a la lesión. En las células endoteliales de la córnea, los cilios primarios se reforman rápidamente en la etapa temprana de la respuesta del tejido a la lesión mecánica, navegando por la morfogénesis celular y el patrón72. Una vez que se completa la cicatrización de la herida y se estabiliza la morfogénesis, los cilios primarios se reabsorben. En las células ciliadas del oído interno, por ejemplo, los cilios adultos vuelven a crecer después de un traumatismo87. En las células tubulares renales, la longitud de los cilios primarios aumenta durante la reparación renal88. Nuestros datos actuales han demostrado que los cilios se vuelven a ensamblar rápidamente en el RPE del ratón durante la cicatrización de heridas inducida por láser y luego se desmontan cuando se completa el proceso de reparación.

Estudios previos demostraron que los cilios primarios influyen pasivamente en la proliferación celular y el ciclo celular62,89. Los cilios se desensamblan cuando las células vuelven a entrar en el ciclo celular y se vuelven a ensamblar en la fase G1/G0 del ciclo celular. No sorprende que los cilios primarios regulen negativamente la proliferación del RPE durante la reparación. Encontramos que el agotamiento de Ift88 para RPE posnatal promueve la tasa de reparación de heridas al mejorar la proliferación celular. El mecanismo subyacente debe investigarse más a fondo, pero la vía de la ß-catenina/Wnt puede ser, al menos en parte, responsable, ya que se ha informado que es inducida por fotocoagulación con láser in vivo73.

En el estudio de desarrollo de RPE, una de las limitaciones técnicas fue usar solo un marcador ciliar, Arl13b, para visualizar los cilios primarios en los tejidos RPE humanos y de ratón. Esta limitación puede explicar en parte las diferencias de ciliación entre nuestros datos y los de otras publicaciones64. Además, utilizamos un controlador Cre de RPE de madurez tardía, BEST1, para eliminar genéticamente Ift88 del RPE del ratón. Dado que la expresión del promotor BEST1 ocurre tarde, la eliminación de los cilios puede tener un impacto limitado en la homeostasis y la maduración del RPE.

En conclusión, este estudio proporciona información sobre el papel de los cilios primarios en el RPE adulto in vivo. Mostramos que los cilios primarios se reforman rápidamente durante la reparación del RPE, lo que regula negativamente la cicatrización de heridas al inhibir la proliferación, lo que proporciona un objetivo terapéutico potencial en las enfermedades degenerativas del RPE. También mostramos que el RPE humano continúa expresando cilios primarios en la edad adulta. Juntos, estos hallazgos aumentan la comprensión del papel que desempeñan los cilios primarios en la patogenia de la reparación defectuosa de heridas por EPR.

Los anticuerpos primarios, la fuente, el número de catálogo y las diluciones son los siguientes: ratón anti-Arl13b (Antibodies Incorporated, N295B/66, 1:2000); conejo anti-zonula occludens-1 (ZO-1) (Invitrogen, 617300, 1:350); ratón anti-Cre (Millipore, clon 2D8, 1:400); ratón anti-RPE65 (Abcam, ab13826, 1:500); ratón anti-Ezrin (Millipore, E8897, 1:500); ratón anti-Ki67 (señalización celular, 9449 T, 1:500); rodamina faloidina (Invitrogen, R415, 1:1000). Anticuerpos secundarios: AlexaFluor 488, 647 y 594 IgG (Life Technologies, 1:200). ProLong Gold Antifade Mount y DAPI, ambos de Invitrogen.

Los ratones CD-1 IGS se obtuvieron de Charles River Laboratory. El Arl13b-mCherry; Los ratones Centrin2-GFP se adquirieron en The Jackson Laboratory (denominados ratones Arl, código RS 027967). Esta doble cepa transgénica expresa fluorescencia mCherry y GFP para marcar la proteína ciliar (Arl13b) y la proteína de los cuerpos basales (Centrin2) respectivamente. Se generó un ratón inactivado Ift88 específico de RPE cruzando los ratones Ift88 floxed (N.º de stock de The Jackson Laboratory 022409) con ratones transgénicos BEST1-Cre71. La PCR para el genotipado de ratón se realizó utilizando ADN genómico de biopsia de cola como se describe90. Los cebadores fueron: BEST1-Cre, Forward: TCCGAAAAGAAAACGTTGATG; Reverso: CCCGGCAAAACAGGTAGTTA; Se usaron animales heterocigóticos como controles de tipo salvaje. Los animales se alojaron bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12 h con libre acceso a agua y comida. Los ratones se adaptaron a la oscuridad durante la noche y se sacrificaron bajo luz roja tenue mediante inhalación de CO2. Los ojos se enuclearon y se diseccionaron en PBS frío, seguido de fijación en paraformaldehído al 4% recién preparado durante 1 hora a temperatura ambiente.

Los ojos de ratones mutantes BBS4 y los controles se obtuvieron del Dr. Nicolas Berbari (Universidad de Indiana). Los ojos de BBS4 se recolectaron de cachorros mutantes y de tipo salvaje de control el día del nacimiento (P0), se fijaron en paraformaldehído al 4 % durante la noche a 4 °C y luego se enviaron en PBS frío.

Los ratones se anestesiaron con una mezcla de xilazina (0,01 mg/g) y ketamina (0,08 mg/g), seguido de dilatación de la pupila con tropicamida (Akorn, Somerset, New Jersey) y fenilefrina. Se utilizó un láser PASCAL de 577 nm (Topcon Medical Laser System, Inc., Santa Clara, CA) asistido por un sistema de lámpara de hendidura para inducir lesiones láser únicas en ojos de ratón91. Los parámetros del láser fueron los siguientes: potencia típica de 70 mW, duración de 20 ms, diámetro de la mancha aérea de 200 μm. Se distribuyeron uniformemente 6 puntos de láser sobre la retina del ratón con una distancia de al menos 1 mm de cada punto. La energía del láser es absorbida por la pigmentación en las células del RPE y emitida como calor a la retina, lo que provoca la muerte de las células fotorreceptoras y del RPE. El éxito del tratamiento está determinado por un blanqueamiento retiniano inmediatamente visible y una fuga en la angiografía con fluoresceína.

Las pupilas de los ratones se dilataron con tropicamida y fenilefrina 10 minutos antes de administrar la anestesia como se describe92. Los ratones se adaptaron a la oscuridad durante 12 h antes de la grabación ERG. El registro de ERG se realizó con un estimulador Celeris ERG (Diagnosys LLC) bajo luz roja tenue de acuerdo con las instrucciones. Brevemente, los ratones se colocaron sobre una almohadilla térmica y se aplicaron lágrimas artificiales en la superficie de la córnea para evitar la sequedad. Se colocaron suavemente dos electrodos ERG en la superficie de la córnea y se controló la estimulación con luz mediante el software Espion como se describe (versión 6; Diagnosys)70. Se registraron cuatro ratones por grupo y 300 lecturas por ojo. En el estudio se realizaron tres repeticiones.

La imagen de OCT se realizó inmediatamente después de la grabación de ERG. Se colocó una lente de contacto (Advanced Vision Technologies) en la córnea del ratón antes de aplicar lágrimas artificiales para mantener la humedad de la córnea como se describe92. Las imágenes OCT se adquirieron utilizando el sistema Heidelberg Spectralis SLO/OCT (Heidelberg Engineering, Alemania). Los escaneos de retina se obtuvieron y se alinearon con imágenes centradas alrededor de la cabeza del nervio óptico. El grosor de la capa de fotorreceptores se midió mediante enmascaramiento doble ciego de las muestras y se promedió mediante el software Heidelberg. La media del grosor de los fotorreceptores en ratones RPE-cKO se comparó con ratones heterocigotos como control.

Para los experimentos de montaje plano de RPE, los ratones se adaptaron a la oscuridad durante 6 h antes de enuclear sus ojos. El tejido de la retina y el segmento anterior (córnea, iris y cuerpo ciliar y cristalino) se retiraron inmediatamente en PBS frío bajo luz roja tenue. A continuación, las capas de RPE/coroides se sumergieron en una fijación de PFA al 4 % durante 1 hora a temperatura ambiente. Los tejidos fijados se lavaron con PBS 3 veces y se incubaron durante 1 h en tampón de bloqueo que contenía suero de cabra al 10 %, Triton X-100 al 0,3 % a temperatura ambiente. Después del bloqueo, las capas de RPE/coroides se incubaron con anticuerpos primarios a 4 °C durante la noche. Después de los lavados en PBS, los tejidos se incubaron en el tampón de bloqueo que contenía anticuerpos secundarios durante 1 hora a temperatura ambiente. Los núcleos se tiñeron con tinción nuclear DAPI 405. Se hicieron ocho cortes radiales desde el borde de la copa ocular hasta el ecuador antes de montarlos con ProLong Gold (Life Technologies) en cubreobjetos. La imagen confocal se realizó con un microscopio confocal Zeiss LSM880.

Se obtuvieron del Departamento de Patología de la Universidad de Stanford, Palo Alto, CA, muestras de tejido sin identificar de humanos sanos y ojos de donantes con degeneración macular relacionada con la edad. El ojo se obtuvo dentro de las 48 h posteriores a la muerte y se almacenó en una cámara húmeda a 4 ° C después de la enucleación. Se extirparon la córnea, el iris, el cristalino y el humor vítreo a través de una incisión coronal realizada 3 mm por detrás del limbo. Los globos se fijaron en PFA al 4 % durante la noche y se lavaron en 1 × PBS a 4 °C. El ojo era de un paciente sin patología del segmento posterior. Se disoció una capa de RPE de aproximadamente 6-8 mm2 de la retina y la coroides antes de aplanarla mediante la técnica de microdisección.

El tejido RPE humano fijado se lavó en PBS durante 1 hora, luego en metanol al 50 % (en PBS) durante 1 hora, metanol al 80 % durante 1 hora y metanol al 100 % durante 1 hora dos veces. A continuación, las muestras se blanquearon con H2O2 al 5 % en DMSO al 20 %/metanol a 4 °C durante la noche. Después del blanqueo, las muestras se lavaron en metanol durante 1 h, luego en DMSO al 20 %/metanol durante 1 h dos veces, luego en metanol al 80 % durante 1 h, metanol al 50 % durante 1 h, PBS durante 1 h dos veces y finalmente en PBS. /0,2 % Triton X-100 durante 1 h dos veces antes de otros procedimientos de tinción69.

Se contó un cilio primario en base a la señal de Arl13b en las Figs. 1 y 2: para distinguir del fondo inespecífico, se contó como un cilio primario una señal continua positiva para Arl13b con una estructura lineal clara. Específicamente, los montajes planos de RPE se capturaron utilizando un microscopio confocal Zeiss LSM 880 a 63x con zoom óptico de 0,6x (223 × 223 μm2). Las imágenes se capturaron con Z-stack (intervalo de 0,3 μm) para una mejor caracterización de los cilios primarios de la tinción no específica. En la Fig. 5, los cilios primarios se determinaron mediante dos marcadores ciliares primarios (señal Arl13b y centrin2).

Para la medición del tamaño de la herida, analizamos la reepitelización en montajes planos RPE con láser de RPE-cKO y ratones de control a las 24 h y 48 h después del tratamiento con láser (cegados a los grupos de muestra). Para este propósito, utilizamos anticuerpos anti ZO-1 o faloidina para visualizar los bordes celulares. El tamaño del área no epitelizada se midió con el software FIJI ImageJ (Institutos Nacionales de Salud Bethesda, MD, EE. UU.) con asistencia manual. La cuantificación de la intensidad de la fluorescencia para la tinción con RPE-65 y ezrin se calculó promediando la intensidad de los píxeles con el software Zeiss de acuerdo con las pautas recomendadas.

Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software Graphpad8 (Prism). Los resultados se expresan como valores medios ± SEM. El análisis estadístico se procesó mediante la prueba t no pareada para la comparación de dos grupos. Los valores de P por debajo de 0,05 se determinaron como estadísticamente significativos.

Nuestro trabajo en muestras humanas se llevó a cabo de acuerdo con los principios de la Declaración de Helsinki para la investigación médica en seres humanos. El estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional (IRB) de la Universidad de Stanford. Este estudio se informa de acuerdo con las pautas ARRIVE. Se recibió previo consentimiento informado por escrito firmado de los representantes legales autorizados para el uso de muestras con fines de investigación previa. Todos los procedimientos relacionados con animales cumplieron con las pautas de la Declaración para el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología, y todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de Facultad de Medicina de la Universidad de Stanford. Todos los procedimientos para ratones BBS4 fueron aprobados por IACUC en la Universidad de Indiana-Universidad de Purdue en Indianápolis.

Los conjuntos de datos utilizados y/o analizados durante el estudio actual están disponibles del autor correspondiente a pedido razonable.

Horani, M., Mahmood, S. & Aslam, TM Atrofia macular del epitelio pigmentario de la retina en pacientes con degeneración macular relacionada con la edad neovascular: ¿cuál es el vínculo? Parte I: Una revisión de la caracterización de enfermedades y asociaciones morfológicas. Oftalmol. El r. 8(2), 235–249. https://doi.org/10.1007/s40123-019-0177-7.PMC6513937 (2019).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Moreno-Marmol, T., Cavodeassi, F. & Bovolenta, P. Fijando los ojos en el epitelio pigmentario de la retina. Frente. Desarrollo celular Biol. 6, 145. https://doi.org/10.3389/fcell.2018.00145.PMC6207792 (2018).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Somasundaran, S., Constable, IJ, Mellough, CB y Carvalho, LS Epitelio pigmentario de la retina y degeneración macular relacionada con la edad: una revisión de los principales mecanismos de la enfermedad. clin. Exp. Oftalmol. 48(8), 1043–1056. https://doi.org/10.1111/ceo.13834.PMC7754492 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Sparrow, JR, Hicks, D. & Hamel, CP El epitelio pigmentario de la retina en la salud y la enfermedad. actual mol. Medicina. 10(9), 802–823. https://doi.org/10.2174/156652410793937813.PMC4120883 (2010).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Zarbin, M., Sugino, I. y Townes-Anderson, E. Revisión concisa: Actualización sobre el trasplante de epitelio pigmentario de la retina para la degeneración macular relacionada con la edad. Traducción de células madre. Medicina. 8(5), 466–477. https://doi.org/10.1002/sctm.18-0282.PMC6477002 (2019).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Al-Zamil, WM & Yassin, SA Avances recientes en la degeneración macular relacionada con la edad: una revisión. clin. interv. Envejecimiento. 12, 1313–1330. https://doi.org/10.2147/CIA.S143508.PMC5573066 (2017).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Mitchell, P., Liew, G., Gopinath, B. y Wong, TY Degeneración macular relacionada con la edad. Lanceta 392 (10153), 1147–1159. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(18)31550-2 (2018).

Artículo PubMed Google Académico

Wong, WL et al. Prevalencia mundial de la degeneración macular relacionada con la edad y proyección de la carga de la enfermedad para 2020 y 2040: una revisión sistemática y un metanálisis. Globo de Lancet. Salud. 2(2), e106–e116. https://doi.org/10.1016/S2214-109X(13)70145-1 (2014).

Artículo PubMed Google Académico

Bandello, F. et al. Avances recientes en el manejo de la degeneración macular seca relacionada con la edad: una revisión. F1000Res 6, 245. https://doi.org/10.12688/f1000research.10664.1 (2017).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bowes Rickman, C., Farsiu, S., Toth, CA y Klingeborn, M. Degeneración macular seca relacionada con la edad: mecanismos, objetivos terapéuticos e imágenes. Invertir. Oftalmol. Vis. ciencia 54(14), ORSF68-80. https://doi.org/10.1167/iovs.13-12757 (2013).

Artículo PubMed Google Académico

Wei, CX et al. Desafíos en el desarrollo de la terapia para la degeneración macular seca relacionada con la edad. Adv. Exp. Medicina. Biol. 854, 103–109. https://doi.org/10.1007/978-3-319-17121-0_15 (2016).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Ambati, J. & Fowler, BJ Mecanismos de la degeneración macular relacionada con la edad. Neurona 75(1), 26–39. https://doi.org/10.1016/j.neuron.2012.06.018.PMC3404137 (2012).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ferrington, DA, Sinha, D. y Kaarniranta, K. Defectos en la proteólisis de las células epiteliales del pigmento retinal y la patología asociada con la degeneración macular relacionada con la edad. prog. Retin. ojo Res. 51, 69–89. https://doi.org/10.1016/j.preteyeres.2015.09.002.PMC4769684 (2016).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Golestaneh , N. , Chu , Y. , Xiao , YY , Stoleru , GL & Theos , AC Autofagia disfuncional en RPE , un factor que contribuye a la degeneración macular relacionada con la edad . Enfermedad de muerte celular. 8(1), e2 https://doi.org/10.1038/cddis.2016.453 (2017).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Zarbin, MA Degeneración macular relacionada con la edad: revisión de la patogénesis. EUR. J. Oftalmol. oct.–dic. 8(4), 199–206 (1998).

Artículo CAS Google Académico

Chichagova, V. et al. Estrategias de regeneración celular para la degeneración macular: pasado, presente y futuro. Ojo (Londres). 32(5), 946–971. https://doi.org/10.1038/s41433-018-0061-z (2018).

Artículo PubMed Central Google Académico

Grierson, I. et al. Desarrollo, reparación y regeneración del epitelio pigmentario de la retina. Ojo (Londres). 8 (parte 2), 255–262. https://doi.org/10.1038/eye.1994.54 (1994).

Artículo Google Académico

Hanovice, Nueva Jersey y col. Regeneración del epitelio pigmentario de la retina del pez cebra después de una ablación genética generalizada. PLoS Genet. 15(1), e1007939. https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1007939 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Jha, BS & Bharti, K. Regeneración de las células del epitelio pigmentario de la retina para curar la ceguera: un camino hacia el tejido artificial personalizado. actual Stem Cell Rep. 1(2), 79–91. https://doi.org/10.1007/s40778-015-0014-4 (2015).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Goetz, SC & Anderson, KV El cilio primario: un centro de señalización durante el desarrollo de los vertebrados. Nat. Rev. Genet. 11(5), 331–344. https://doi.org/10.1038/nrg2774.PMC3121168 (2010).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Satir, P. & Christensen, ST Descripción general de la estructura y función de los cilios de los mamíferos. año Rev. Fisiol. 69, 377–400. https://doi.org/10.1146/annurev.physiol.69.040705.141236 (2007).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Singla, V. & Reiter, JF El cilio primario como antena de la célula: señalización en un orgánulo sensorial. Ciencia 313 (5787), 629–633. https://doi.org/10.1126/science.1124534 (2006).

Artículo ADS CAS PubMed Google Scholar

Veland, IR, Awan, A., Pedersen, LB, Yoder, BK y Christensen, ST Cilios primarios y vías de señalización en el desarrollo, la salud y la enfermedad de los mamíferos. La nefrona. Fisiol. 111(3), págs. 39-53. https://doi.org/10.1159/000208212 (2009).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Alvarado, JA et al. Distribución del desarrollo de los cilios primarios en la vía visual retinófuga. J.Comp. Neurol. 529(7), 1442–1455. https://doi.org/10.1002/cne.25029 (2021).

Artículo PubMed Google Académico

Kowal, TJ et al. Distribución de marcadores de cilios primarios prototípicos en subtipos de células ganglionares de la retina. J.Comp. Neurol. 530(12), 2176–2187. https://doi.org/10.1002/cne.25326 (2022).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Kowal, TJ et al. Modulación optogenética de la presión intraocular en un modelo de ratón con hipertensión ocular inducida por glucocorticoides. Traducir Vis. ciencia Tecnología 10(6), 10. https://doi.org/10.1167/tvst.10.6.10 (2021).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Park, SM, Jang, HJ & Lee, JH Funciones de los cilios primarios en el cerebro en desarrollo. Frente. Neurociencia Celular. 13, 218. https://doi.org/10.3389/fncel.2019.00218 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ma, X. et al. Síndrome oculocerebrorrenal de Lowe: Encuesta de presentaciones oftálmicas y manejo. EUR. J. Oftalmol. 30(5), 966–973. https://doi.org/10.1177/1120672120920544 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Ning, K. et al. Caracterización de la formación de cilios primarios en organoides retinianos derivados de ESC humanos. Células Madre Int. 2023, 6494486. https://doi.org/10.1155/2023/6494486 (2023).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Ning, K. et al. Cilios primarios en células amacrinas en desarrollo retiniano. Invertir. Oftalmol. Vis. ciencia 62(9), 15. https://doi.org/10.1167/iovs.62.9.15 (2021).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ning, K. et al. Distribución defectuosa de INPP5E en el síndrome de Senior-Loken relacionado con NPHP1. Lunar. el gen Por. Con. 9(1), e1566. https://doi.org/10.1002/mgg3.1566 (2021).

Artículo CAS Google Académico

Prosseda, PP et al. La estimulación optogenética de fosfoinosítidos revela un papel fundamental de los cilios primarios en la regulación de la presión ocular. ciencia Adv. 6(18), eaay8699. https://doi.org/10.1126/sciadv.aay8699 (2020).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Amador-Arjona, A. et al. Los cilios primarios regulan la proliferación de progenitores amplificadores en el hipocampo adulto: implicaciones para el aprendizaje y la memoria. J. Neurosci. 31(27), 9933–9944. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.1062-11.2011 (2011).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Christensen, ST, Pedersen, SF, Satir, P., Veland, IR y Schneider, L. El cilio primario coordina las vías de señalización en el control del ciclo celular y la migración durante el desarrollo y la reparación de tejidos. actual Desarrollo superior Biol. 85, 261–301. https://doi.org/10.1016/S0070-2153(08)00810-7 (2008).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Goto, H., Inoko, A. & Inagaki, M. Progresión del ciclo celular por la represión de la formación de cilios primarios en células en proliferación. Mol celular. Ciencias de la vida 70(20), 3893–3905. https://doi.org/10.1007/s00018-013-1302-8 (2013).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Han, YG & Alvarez-Buylla, A. Papel de los cilios primarios en el desarrollo cerebral y el cáncer. actual Opinión Neurobiol. 20(1), 58–67. https://doi.org/10.1016/j.conb.2009.12.002 (2010).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Veland, IR, Lindbaek, L. & Christensen, ST Vinculación del cilio primario con la migración celular en la reparación de tejidos y el desarrollo cerebral. Biociencia 64(12), 1115–1125. https://doi.org/10.1093/biosci/biu179 (2014).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Berbari, NF, O'Connor, AK, Haycraft, CJ y Yoder, BK El cilio primario como centro de señalización complejo. actual Biol. 19(13), R526–R535. https://doi.org/10.1016/j.cub.2009.05.025 (2009).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Dyson, JM y col. INPP5E regula la función de la zona de transición de los cilios dependiente de fosfoinosítidos. J. Cell Biol. 216(1), 247–263. https://doi.org/10.1083/jcb.201511055 (2017).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bujakowska, KM, Liu, Q. & Pierce, EA Cilios fotorreceptores y ciliopatías retinianas. Harb de primavera fría. Perspectiva. Biol. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a028274 (2017).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Wheway, G., Lord, J. & Baralle, D. Empalme en la patogenia, diagnóstico y tratamiento de las ciliopatías. bioquimica Biografía. Acta Gen Regul. mecánico 1862(11–12), 194433. https://doi.org/10.1016/j.bbagrm.2019.194433 (2019).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Wheway, G., Parry, DA & Johnson, CA El papel de los cilios primarios en el desarrollo y la enfermedad de la retina. Organogénesis 10(1), 69–85. https://doi.org/10.4161/org.26710 (2014).

Artículo PubMed Google Académico

Hildebrandt, F., Benzing, T. y Katsanis, N. Ciliopatías. N. ingl. J.Med. 364(16), 1533–1543. https://doi.org/10.1056/NEJMra1010172 (2011).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Wheway, G., Mitchison, HM, Genomics England Research C. Oportunidades y desafíos para la comprensión molecular de las ciliopatías: el proyecto de los 100 000 genomas. Frente. Gineta. 10, 127. https://doi.org/10.3389/fgene.2019.00127 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Li, S. et al. La ectodisplasina A regula la función de la barrera epitelial a través de la vía de señalización del erizo sónico. J. Célula Mol. Medicina. 22(1), 230–240. https://doi.org/10.1111/jcmm.13311 (2018).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Boehlke, C. et al. Un papel independiente de los cilios de Ift88/polaris durante la migración celular. PLoS ONE 10(10), e0140378. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0140378 (2015).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Klink, BU, Gatsogiannis, C., Hofnagel, O., Wittinghofer, A. y Raunser, S. Estructura del complejo central humano BBSome. Elife https://doi.org/10.7554/eLife.53910 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Klink, BU et al. Un complejo central BBSome recombinante y cómo interactúa con la carga ciliar. Elife https://doi.org/10.7554/eLife.27434 (2017).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Liu, P. & Lechtreck, KF El complejo proteico del síndrome de Bardet-Biedl es un adaptador que amplía el rango de carga de los trenes de transporte intraflagelar para la exportación ciliar. proc. nacional Academia ciencia EE.UU. 115(5), E934–E943. https://doi.org/10.1073/pnas.1713226115 (2018).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Singh, SK, Gui, M., Koh, F., Yip, MC y Brown, A. Estructura y mecanismo de activación del complejo de tráfico de proteínas de membrana BBSome. Elife https://doi.org/10.7554/eLife.53322 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Tran, M. et al. Características clínicas de la miopía alta en mujeres portadoras de mutaciones patogénicas en RPGR: Serie de casos y revisión de la literatura. Geneta oftálmica. https://doi.org/10.1080/13816810.2022.2113544 (2022).

Artículo PubMed Google Académico

Wang, SF et al. Revisión de las manifestaciones oculares del Síndrome de Joubert. Genes (Basilea). https://doi.org/10.3390/genes9120605 (2018).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Chamling, X. et al. La proteína satélite centriolar AZI1 interactúa con BBS4 y regula el tráfico ciliar de BBSome. PLoS Genet. 10(2), e1004083. https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004083 (2014).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Uytingco, CR et al. Se requiere BBS4 para la coordinación del transporte intraflagelar y el número de cuerpos basales en los cilios olfativos de los mamíferos. J. ciencia celular. https://doi.org/10.1242/jcs.222331 (2019).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Aksanov, O., Green, P. & Birk, RZ BBS4 afecta directamente la proliferación y diferenciación de los adipocitos. Mol celular. Ciencias de la vida 71(17), 3381–3392. https://doi.org/10.1007/s00018-014-1571-x (2014).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Irigoin, F. & Badano, JL Manteniendo el equilibrio entre proliferación y diferenciación: El cilio primario. actual genoma 12(4), 285–297. https://doi.org/10.2174/138920211795860134 (2011).

Artículo CAS Google Académico

Higginbotham, H. et al. Arl13b en los cilios primarios regula la migración y ubicación de las interneuronas en la corteza cerebral en desarrollo. desarrollo Celúla. 23(5), 925–938. https://doi.org/10.1016/j.devcel.2012.09.019 (2012).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Schneider, L. et al. La migración celular direccional y la quimiotaxis en la respuesta de cicatrización de heridas a PDGF-AA están coordinadas por el cilio primario en los fibroblastos. Fisiol Celular. Bioquímica 25(2–3), 279–292. https://doi.org/10.1159/000276562 (2010).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Li, S. et al. La privación del sueño interrumpe el sistema lagrimal e induce la enfermedad del ojo seco. Exp. mol. Medicina. 50(3), e451. https://doi.org/10.1038/emm.2017.285 (2018).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Hosio, M. et al. Señalización ciliar primaria en la contribución de la piel a la cicatrización y cicatrización de heridas. Frente. Desarrollo celular Biol. 8, 578384. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.578384 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Li, S. et al. La proteína ectodisplasina A promueve la proliferación de células epiteliales de la córnea. J. Biol. química 292(32), 13391–13401. https://doi.org/10.1074/jbc.M117.803809 (2017).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Jonassen, JA, San Agustin, J., Follit, JA y Pazour, GJ La eliminación de IFT20 en el riñón de ratón provoca una desorientación del huso mitótico y enfermedad renal quística. J. Cell Biol. 183(3), 377–384. https://doi.org/10.1083/jcb.200808137 (2008).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

May-Simera, HL et al. La maduración del epitelio pigmentario de la retina mediada por cilio primario se interrumpe en las células de pacientes con ciliopatía. Informe celular 22(1), 189–205. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2017.12.038 (2018).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Patnaik, SR et al. Las proteínas del síndrome de Bardet-Biedl regulan el desmontaje de los cilios durante la maduración del tejido. Mol celular. Ciencias de la vida 76(4), 757–775. https://doi.org/10.1007/s00018-018-2966-x (2019).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Nishiyama, K., Sakaguchi, H., Hu, JG, Bok, D. y Hollyfield, JG Localización de Claudin en los cilios del epitelio pigmentario de la retina. Anat. rec. 267(3), 196–203. https://doi.org/10.1002/ar.10102 (2002).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Munoz-Estrada, J. & Ferland, RJ Ahi1 promueve el reclutamiento ciliar de Arl13b, regula la estabilidad de Arl13b y es necesario para la migración celular normal. J. ciencia celular. 132, 17. https://doi.org/10.1242/jcs.230680 (2019).

Artículo CAS Google Académico

Obert, E. et al. Dirigirse a la proteína de unión estrecha, zonula occludens-1, con el péptido mimético connexin43, alphaCT1, reduce la fisiopatología del RPE dependiente de VEGF. J. Mol. Medicina. (Berl.). 95(5), 535–552. https://doi.org/10.1007/s00109-017-1506-8 (2017).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Mykytyn, K. et al. Los ratones sin síndrome de Bardet-Biedl tipo 4 (BBS4) implican a Bbs4 en la formación de flagelos pero no en el ensamblaje global de cilios. proc. nacional Academia ciencia EE.UU. 101(23), 8664–8669. https://doi.org/10.1073/pnas.0402354101 (2004).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Renier, N. et al. iDISCO: un método simple y rápido para inmunomarcar muestras de tejido grandes para obtener imágenes de volumen. Celda 159(4), 896–910. https://doi.org/10.1016/j.cell.2014.10.010 (2014).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Chen, M., Kim, L., Lu, CW, Zeng, H. y Vollrath, D. Una línea de ratón transgénico cre selectivo para RPE inducible eficiente. Exp. ojo Res. https://doi.org/10.1016/j.exer.2020.108370 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Iacovelli, J. et al. Generación de ratones transgénicos Cre con expresión ocular específica de RPE posnatal. Invertir. Oftalmol. Vis. ciencia 52(3), 1378–1383. https://doi.org/10.1167/iovs.10-6347 (2011).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Blitzer, AL et al. La dinámica de los cilios primarios instruye el patrón de tejido y la reparación del endotelio corneal. proc. nacional Academia ciencia EE. UU. 108(7), 2819–2824. https://doi.org/10.1073/pnas.1016702108.3041123 (2011).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Han, JW, Lyu, J., Park, YJ, Jang, SY & Park, TK La señalización de Wnt/beta-catenina media la regeneración del epitelio pigmentario de la retina después de la fotocoagulación con láser en el ojo del ratón. Invertir. Oftalmol. Vis. ciencia 56(13), 8314–8324. https://doi.org/10.1167/iovs.15-18359 (2015).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Kasaoka, M., Ma, J. & Lashkari, K. c-Met modula la respuesta migratoria del RPE a la lesión retiniana inducida por láser. PLoS ONE 7(7), e40771. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0040771 (2012).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

von Leithner, PL, Ciurtin, C. & Jeffery, G. Las lesiones microscópicas del epitelio pigmentario de la retina de los mamíferos inducen una proliferación generalizada con diferencias de magnitud entre el centro y la periferia. mol. Vis. 16, 570–581 (2010).

Google Académico

Alvarado, JA et al. Distribución del desarrollo de los cilios primarios en la vía visual retinófuga. J.Comp. Neurol. https://doi.org/10.1002/cne.25029 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Bangs, FK, Schrode, N., Hadjantonakis, AK & Anderson, KV Especificidad de linaje de los cilios primarios en el embrión de ratón. Nat. Biol celular. 17(2), 113–122. https://doi.org/10.1038/ncb3091 (2015).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Sipos, E., Komoly, S. & Acs, P. Comparación cuantitativa de la expresión y longitud del marcador de cilios primarios en el cerebro del ratón. J. Mol. Neurosci. 64(3), 397–409. https://doi.org/10.1007/s12031-018-1036-z (2018).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Sterpka, A. et al. Cambios de morfología divergentes de cilios primarios astrocíticos y neuronales bajo insultos reactivos. mol. Cerebro. 13(1), 28. https://doi.org/10.1186/s13041-020-00571-y (2020).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Cho, IH et al. El papel de la señalización de Wnt/beta-catenina en la restauración del epitelio pigmentario de la retina derivado de células madre pluripotentes inducidas después de la fotocoagulación con láser. Láseres Med. ciencia 34(3), 571–581. https://doi.org/10.1007/s10103-018-2631-5 (2019).

Artículo PubMed Google Académico

Jobling, AI et al. La terapia con láser de nanosegundos revierte los cambios patológicos y moleculares en la degeneración macular relacionada con la edad sin dañar la retina. FASEB J. 29(2), 696–710. https://doi.org/10.1096/fj.14-262444 (2015).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Lehmann-Mántaras , G. , Schreiner , R. , de la Fuente , E. & Rodriguez-Boulan , E. Expresión de RPE cilios primarios en ratones adultos . Invertir. Oftalmol. Vis. ciencia 54(15), 6084 (2013).

Google Académico

Choi, H. et al. Los cilios primarios regulan negativamente la melanogénesis en los melanocitos y la pigmentación en un modelo de piel humana. PLoS ONE 11(12), e0168025. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168025 (2016).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Schneider, S. et al. La pérdida del gen ciliar bbs8 da como resultado defectos fisiológicos en el epitelio pigmentario de la retina. Frente. Desarrollo celular Biol. 9, 607121. https://doi.org/10.3389/fcell.2021.607121 (2021).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Evans, ND, Oreffo, RO, Healy, E., Thurner, PJ & Man, YH Mecanobiología epitelial, cicatrización de heridas en la piel y el nicho de células madre. J. Mec. Comportamiento biomedicina Mate. 28, 397–409. https://doi.org/10.1016/j.jmbbm.2013.04.023 (2013).

Artículo PubMed Google Académico

Le, H. et al. La señalización de Hedgehog es esencial para la cicatrización normal de heridas. Reparación de heridas Regen. 16 de noviembre a diciembre (6), 768–773. https://doi.org/10.1111/j.1524-475X.2008.00430.x (2008).

Artículo Google Académico

Sobkowicz, HM, Slapnick, SM & August, BK El kinocilio de las células ciliadas auditivas y la evidencia de su papel morfogenético durante la regeneración de estereocilios y placas cuticulares. J. Neurocitol. 24(9), 633–653. https://doi.org/10.1007/BF01179815 (1995).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Verghese, E. et al. Los cilios primarios renales se alargan después de la necrosis tubular aguda. Mermelada. Soc. nefrol. 20(10), 2147–2153. https://doi.org/10.1681/ASN.2008101105 (2009).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Izawa, I., Goto, H., Kasahara, K. e Inagaki, M. Temas actuales de vínculos funcionales entre los cilios primarios y el ciclo celular. Cilia 4, 12. https://doi.org/10.1186/s13630-015-0021-1 (2015).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Chang, KC y col. Efectos opuestos de los factores de crecimiento y diferenciación en la especificación del destino celular. actual Biol. 29(12), 1963-1975.e5. https://doi.org/10.1016/j.cub.2019.05.011 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Sramek, CK, Leung, LS, Paulus, YM & Palanker, DV Ventana terapéutica de la fotocoagulación retiniana con láser verde (532 nm) y amarillo (577 nm). oftalmo. Cirugía Imágenes por láser. 43(4), 341–347. https://doi.org/10.3928/15428877-20120426-05 (2012).

Artículo Google Académico

Zhang, J. et al. Hipertensión ocular inducida por aceite de silicona y neurodegeneración glaucomatosa en ratones. Elife https://doi.org/10.7554/eLife.45881 (2019).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

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Agradecemos al Dr. Daniel Palanker por brindarnos valiosos consejos y apoyo; al Dr. Ruwan A. Silva por proporcionar tejido RPE humano; Dr. Philip P. Prosseda, Dr. Xiaowan Ma, Dr. Biao Wang y Dr. Qing Wang por sus contribuciones técnicas.

Este trabajo fue apoyado por NIH/NEI K08-EY022058 (YS), R01-EY025295 (YS), R01-EY032159 (YS), R01-EY-023295 (YH) R01-EY024932 (YH), ​​R01-EY025790 (DV) , R01-DK114008 (NFB). VA merit CX001298 (YS), Ziegler Foundation for the Blind (YS), Showalter Foundation (YS), Children's Health Research Institute Award (YS). Investigación para la prevención de la ceguera Subvención sin restricciones (Oftalmología de Stanford), Sociedad Estadounidense de Glaucoma (YS), Asociación del Síndrome de Lowe (YS) y Fundación del Ojo de los Caballeros Templarios (YS). Beca P30 Vision Center para el departamento de Oftalmología de Stanford (P30EY026877). YS es becaria de la Facultad Laurie Kraus Lacob en Medicina Traslacional Pediátrica. Este trabajo también fue apoyado por NIH/NEI K99-EY34932 (KN), International Retinal Research Foundation (KN), BrightFocus Foundation (KN) y ARVO travel Grant (KN).

Departamento de Oftalmología, Facultad de Medicina de la Universidad de Stanford, 1651 Page Mill Road, Rm 2220, Palo Alto, CA, 94304, EE. UU.

Ke Ning, Mohajeet B. Bhuckory, Chien-Hui Lo, Brent E. Sendayen, Tia J. Kowal, Ming Chen, Douglas Vollrath, Vinit B. Mahajan, Yang Hu y Yang Sun

Administración de Veteranos de Palo Alto, Palo Alto, CA, EE. UU.

Brent E. Sendayen y Yang Sun

Departamento de Genética, Facultad de Medicina de la Universidad de Stanford, Palo Alto, CA, EE. UU.

douglas vollrath

Departamento de Biología, Universidad de Indiana-Universidad de Purdue Indianápolis, Indianápolis, IN, EE. UU.

Ruchi Bansal y Nicolás F. Berbari

Departamento de Oftalmología, Facultad de Medicina de la Universidad de Pittsburgh, Pittsburgh, PA, EE. UU.

Kun Che Chang

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KN, YS diseñó y llevó a cabo todos los experimentos y escribió el manuscrito. MB contribuido al tratamiento con láser y edición del manuscrito. BS contribuyó a generar líneas de ratón. TK, CHL y MC contribuyeron al análisis de datos de diseño experimental. RS proporcionó ojos de ratones sin BBS4 y ayudó con el análisis. DV, NFB, KCC, VM y YH brindaron valiosos consejos y sugerencias experimentales para este estudio. YS supervisó todo el proyecto.

Correspondencia a Yang Sun.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Ning, K., Bhuckory, MB, Lo, CH. et al. Reparación de heridas asociada a cilios mediada por IFT88 en el epitelio pigmentario de la retina. Informe científico 13, 8205 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-35099-3

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Recibido: 06 Diciembre 2022

Aceptado: 12 de mayo de 2023

Publicado: 21 mayo 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-35099-3

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